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產(chǎn)品名稱 :
一步法RT-PCR反轉(zhuǎn)試劑盒
品牌 :
BIOMIGA
貨號(hào) :
RT0213-01
規(guī)格 :
20次/50次/100次
詳細(xì)信息 :
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
一步法RT-PCR試劑盒是為從總RNA或mRNA中特異性的反轉(zhuǎn)和擴(kuò)增目的RNA而設(shè)計(jì)的。該系統(tǒng)在一種優(yōu)化反應(yīng)體系中共用MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶的預(yù)混液，能夠檢測(cè)長達(dá)4.0 kb的RNA目的片段。總RNA的用量可從0.01 pg到2 μg之間，該試劑盒為50 μl的反應(yīng)體系。
試劑盒組分
產(chǎn) 品 | RT0213-00 | RT0213-01 | RT0213-02 | RT0213-03 |
Reactions | 5 | 20 | 50 | 100 |
Enzyme mix: MMLV RT/ Hot start Taq Mix | 5 μL | 20 μL | 50 μL | 100 μL |
2× Reaction mix （optimized bμffer contains dNTP and Mg2+） | 125 μL | 500 μL | 1.25 mL | 2×1.25 mL |
5 mM Magnesiμm Sμlfate | 125 μL | 500 μL | 1.0 mL | 2×1.0 mL |
dd H2O | 150 μL | 600 μL | 1.5 mL | 2×1.5 mL |
保存條件
該試劑盒-20°C保存，在此條件下可保存二年。
產(chǎn)品特點(diǎn)
方便的一管式設(shè)置
*的RT-PCR緩沖液及高效性
高度敏感性、特異性及重復(fù)性
推薦RT-PCR反應(yīng)體系
建議用如下組成配制RT-PCR反應(yīng)起始液：
組分 | 50 μl 體系 | 終濃度 |
2× Reaction mix | 25 μL | 1× |
Enzyme mix | 1.0 μL |
|
Forward Primer （10 μM） | 1.0 μL | 200 nM |
Reverse Primer （10 μM） | 1.0 μL | 200 nM |
RNA template | × μL | Variable （0.01pg - 2μg） |
Final Volμme （μL） | 50 μL | 用dd H2O補(bǔ)足50 μL體系 |
*如有必要，鎂鹽濃度可進(jìn)一步優(yōu)化。
1．將反應(yīng)溶液在冰上解凍。
2．按下列熱循環(huán)程序進(jìn)行反應(yīng)，以便cDNA合成之后立刻進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
cDNA合成: 1 cycle: 40–50°C for 10 min
變性: 1 cycle: 94°C for 2 min
PCR 擴(kuò)增: 40 cycles:
94°C for 15 s
55-65°C for 30 s
68°C for 1 min/kb
3．用凝膠電泳檢測(cè)RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。
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