RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。

注意事項(xiàng)：

1.       質(zhì)粒拷貝數(shù): 純化中低拷貝的質(zhì)粒時(shí)，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1, B1, N3, RET, 100% ethonal 相同體積的DNA Wash Buffer和Endofree Elution Buffer.

2.       轉(zhuǎn)化菌: 若為-70^oC甘油凍存的菌，請(qǐng)先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個(gè)菌落進(jìn)行培養(yǎng)。

3.       切勿直接取凍存的菌進(jìn)行培養(yǎng)。

操作簡明步驟：

1.       取50 µL新鮮的菌液接種到15-50 mL （勿超過 50 mL）的LB培養(yǎng)基（含適量抗生素），37^oC震蕩培養(yǎng)14-16小時(shí)。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。

2.       加入2.5 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細(xì)菌沉淀重新懸浮。

3.       加入2.5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。 

4.       加入1 mL Buffer N3， 立即反轉(zhuǎn)5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時(shí)出現(xiàn)白色絮狀沉淀。

5.       將裂解液轉(zhuǎn)移至高速離心管，室溫下在12,000 x g 離心10分鐘。

6.       轉(zhuǎn)移上清液5 mL，向裂解液中加入1倍體積的Buffer RET （即每5 mL裂解液加入5 mL Buffer RET）,及3 mL的100% ethonal，用手用力甩5次以混勻，需馬上離心過DNA柱。

7.       立即轉(zhuǎn)移6 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下5,000 x g離心2分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)此步直至所有的溶液通過DNA柱。

8.       可選：向離心柱中加入5 mL Buffer KB，室溫下5,000 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。

9.       向離心柱中加入5 mL 70% 乙醇，室溫下5,000 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復(fù)步驟“9”。

10.    將離心柱放回高速離心機(jī)中，室溫下5,000 x g開蓋離心10分鐘，以*去除殘留的乙醇。

11.    將離心柱轉(zhuǎn)至一個(gè)新的15 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入1 mL 的Endofree Elution Buffer, 室溫放置1分鐘，5,000 x g 離心5分鐘，以洗脫質(zhì)粒DNA。

12.    將15 mL離心管中的洗脫液上柱再放置洗脫1分鐘，5,000 x g 離心5分鐘。 兩次洗脫將提高得率。

操作流程：