| 試劑盒組分： | Catalog# | PD1512-00 | PD1512-01 | PD1512-02 | | Preps | 2 | 10 | 25 | | ezBindTM Columns | 2 | 10 | 25 | | Filter syringe （60 mL） | 2 | 10 | 25 | | Buffer A1 | 22 mL | 110 mL | 270 mL | | Buffer B1 | 22 mL | 110 mL | 270 mL | | Buffer C1 | 27 mL | 135 mL | 330 mL | | RNase A （20 mg/mL） | 2.2 mg （110 µL） | 11 mg （550 µL） | 27 mg （1.35 µL） | | Elution Buffer | 6 mL | 30 mL | 60 mL | | User Manual | 1 | 1 | 1 | 保存條件： RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。 注意事項： - 質(zhì)粒拷貝數(shù)：純化中低拷貝的質(zhì)粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同體積的Wash Buffer （70% 乙醇）和Elution Buffer.
- 轉(zhuǎn)化菌：若為-70oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養(yǎng)后，再重新挑選新的單個菌落進行培養(yǎng)。
- 柱結(jié)合能力：1 mg
操作簡明步驟： - 取100 µL新鮮的菌液接種到150-200 mL （勿超過 200 mL）的LB培養(yǎng)基（含適量抗生素），37oC震蕩培養(yǎng)14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入10 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
- 加入 10 mL Buffer B1, 輕輕地反轉(zhuǎn)5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
- 加入12 mL Buffer C1, 立即反轉(zhuǎn)5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現(xiàn)白色絮狀沉淀。
- 將裂解液轉(zhuǎn)移至過濾器中，放在一個50 mL的試管上靜置10分鐘。管中的白色絮狀沉淀浮上來，對準50 mL的管向下壓，使裂解液盡可能多的通過，有些裂解液可能會殘留在沉淀中。注：靜置10 分鐘時RNase A將工作，排除RNA污染。
- 加入12 mL 100% 乙醇，立即混勻，需馬上離心過DNA柱。
- 立即轉(zhuǎn)移20 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復此步直至所有的溶液通過DNA柱。
- 向離心柱中加入10 mL 70% 乙醇，室溫下>2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“9”。
- 將離心柱放回高速離心機中，室溫下>2,500 x g 開蓋離心10分鐘，以*去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉(zhuǎn)至一個新的50 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入1-1.5 mL滅菌ddH2O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置1分鐘，5,000 x g離心5分鐘，以洗脫質(zhì)粒DNA。若想提高得率，將50 mL離心管中的洗脫液再加到柱的中間，5,000 x g離心5分鐘以洗脫質(zhì)粒DNA。
操作流程：  |
更新時間：2013-01-05 
瀏覽次數(shù)：997
我的位置：