| 50~100 mL 細菌培養液中純化200 μg高純度質粒DNA 試劑盒組分： | Catalog | PD1413-01 | | Preps | 10 | | ezBindTM Columns | 10 | | Filter syringe （25 mL） | 10 | | Buffer A1 | 30 mL | | Buffer B1 | 30 mL | | Buffer C1 | 35 mL | | Buffer KB | 35 mL | | RNase A （20 mg/mL） | 3 mg（150 µL） | | Elution Buffer | 25 mL | | User Manual | 1 | 保存條件： RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。 注意事項： - 質粒拷貝數：純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,C1,100%乙醇，相同體積的Wash Buffer （70% 乙醇）和Elution Buffer.
- 轉化菌：若為-70oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。切勿直接取凍存在4℃的菌進行培養。
- 柱結合能力：250 μg
操作簡明步驟： - 取50 µL新鮮的菌液接種到15-50 mL （勿超過 50 mL）的LB培養基（含適量抗生素），37oC震蕩培養14-16小時。室溫下5,000 x g離心10分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入2.5 mL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩確保細菌沉淀重新懸浮。
- 加入 2.5 mL Buffer B1, 輕輕地反轉5-10 次以混合均勻，然后靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
- 加入3.0 mL Buffer C1, 立即反轉5次，用手用力搖晃3-5次充分混勻，此時出現白色絮狀沉淀。
- 將裂解液轉移至過濾器中，放在一個15 mL的試管上靜置10分鐘。管中的白色絮狀沉淀浮上來，對準15 mL的管向下壓，使裂解液盡可能多的通過，有些裂解液可能會殘留在沉淀中。注：靜置10 分鐘時RNase A將工作，排除RNA污染。
- 加入3.0 mL 100% 乙醇，立即搖勻，需馬上離心過DNA柱。
- 立即轉移6.0 mL裂解液/收集管至帶收集管的DNA柱中，室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復此步直至所有的溶液通過DNA柱。
- 可選: 向DNA柱中加入 3.0 mL Buffer KB, 室溫下> 2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
- 向離心柱中加入4.0 mL 70% 乙醇，室溫下>2,500 x g 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“9”。
- 將離心柱放回高速離心機中，室溫下>2,500 x g 開蓋離心10分鐘，以*去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉至一個新的15 mL離心管中，向DNA柱膜的正中加入0.5-1 mL滅菌ddH2O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置1分鐘，>2,500 x g離心5分鐘，以洗脫質粒DNA。若想提高得率，將15 mL離心管中的洗脫液再加到柱的中間，>2,500 x g離心5分鐘以洗脫質粒DNA。
操作流程： |
更新時間：2013-01-05 
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