臺盼藍(Trypan Blue)的作用機理:
正常的活細胞,胞膜結構完整,能夠排斥臺盼藍(Trypan Blue),使之不能夠進入胞內;而喪失活性或細胞膜不完整的細胞,胞膜的通透性增加,可被臺盼藍(Trypan Blue)染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失,即可認為細胞已經死亡,這與中性紅作用相反。因此,借助臺盼藍(Trypan Blue)染色可以非常簡便、快速地區分活細胞和死細胞。臺盼藍(Trypan Blue)是組織和細胞培養中zui常用的死細胞鑒定染色方法之一。
臺盼藍(Trypan Blue)染色后,通過顯微鏡下直接計數或顯微鏡下拍照后計數,就可以對細胞存活率進行比較的定量。
臺盼藍(Trypan Blue)染色只需3-5分鐘即可完成,并且操作非常簡單。
臺盼藍(Trypan Blue)配置和染色步驟:
1、4%臺盼藍母液:稱取4g臺盼藍,加少量蒸餾水研磨,加雙蒸水至100ml,用濾紙過濾,4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。
2、胰酶消化貼壁細胞,制備單細胞懸液,并作適當稀釋。
3、染色:細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合混勻。(終濃度0.04%)
4、計數:在三分鐘內,分別計數活細胞和死細胞。
5、鏡下觀察,死細胞被染成明顯的藍色,而活細胞拒染呈無色透明狀。
6、統計細胞活力:活細胞率(%)= 活細胞總數/(活細胞總數+死細胞總數)×100%