Pfu DNA 聚合酶
更新時(shí)間：2016-07-11 1592
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Pfu DNA 聚合酶
的詳細(xì)介紹
Pfu DNA 聚合酶
| 目錄號(hào) | 規(guī)格 | 備注 | | | E002-01A | 250U | 含dNTP | | | E002-01B | A包裝×5 | 含dNTP | | E002-02A | 250U | 不含dNTP
| | E002-02B | A包裝×5 | 不含dNTP
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| | | · 制品內(nèi)容 （250 U） | | Pfu DNA聚合酶（5 U/μl） | 50 μl | | dNTP 混合液 （各10 mM） | 250 μl | | 10 × Pfu Buffer with Mg2+ | 1 ml |
| | | | · 制品說明 | | | | 本酶為Pyrococcus furiosus中分離的pfu DNA pol 基因在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)后經(jīng)多次純化分離而得。Pfu DNA聚合酶具有3’-5’外切酶（校正）活性，當(dāng)聚合反應(yīng)發(fā)生堿基錯(cuò)配時(shí)，聚合酶的校正活性可將錯(cuò)配的堿基切除。Pfu DNA聚合酶為使用范圍zui廣的高保真DNA聚合酶，其錯(cuò)誤率僅為1.3x10-6，推薦Pfu DNA聚合酶用于需高保真的PCR反應(yīng)。 | | |
| | · 用 途 | | 用于要求保真度比較高的PCR反應(yīng)，包括克隆PCR、DNA片段拼接、引入突變、全基因合成等（參見 Sinobio 實(shí)驗(yàn)方案）。 | | | | · 產(chǎn)品特點(diǎn) | 高保真：Pfu DNA聚合酶是使用zui廣泛的高保真酶，其保真度為普通Taq酶的10倍。
靈敏：可從0.05ng人基因組DNA模板中擴(kuò)增出特定基因片段（圖例一）。
快捷：PCR反應(yīng)所必需試劑全集于一管之中，數(shù)分鐘即可完成反應(yīng)體系配置。
便利：10μl, 25μl 或50μl體系全部適用。
| | | | · 質(zhì)量保證 | 經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE檢測(cè)純度大于95%；
PCR方法檢測(cè)無大腸桿菌DNA殘留，無核酸內(nèi)、外切酶污染。 | | | | · 使用建議 | |
Pfu DNA聚合酶產(chǎn)生的PCR產(chǎn)物為平滑末端，無3’端"A"突出，其PCR產(chǎn)物的克隆有兩種方案。
1. PCR前引物進(jìn)行5’端加磷修飾或?qū)CR產(chǎn)物磷酸化處理后再直接克隆于平滑末端的載體中（參見 Sinobio實(shí)驗(yàn)方案）。
2. 將產(chǎn)物3’末端加A后再與T-Vector連接（參見 Sinobio 實(shí)驗(yàn)方案）。
3. 由于Pfu DNA聚合酶的校對(duì)活性可引起引物從3′端被部分降解。因此在設(shè)計(jì)引物時(shí)應(yīng)適當(dāng)增加引物的長度，理想的引物長度為20-30堿基。另外為了減少由3′-5′外切酶活性引起的引物降解，盡量在冰上配置反應(yīng)體系，并zui后加入Pfu酶。
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