大（小）鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液 KIT 說明書
大（小）鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液 KIT 說明書 大（小）鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液 KIT 說明書
【產(chǎn)品規(guī)格】
200ml/Kit
【產(chǎn)品組成】
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
| 名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
A | 中性粒細(xì)胞分離液試劑 A |
| 200ml |
B | 樣本稀釋液 | 2010C1119 | 200ml |
C | 清洗液（贈品） | 2010X1118 | 200ml |
D | 紅細(xì)胞裂解液（贈品） | NH4CL2009 | 100ml |
E | 紅細(xì)胞沉降液（6%羥乙基淀粉） | HES-TBD550-80 | 80ml |
F | 說明書 |
| 1 份 |
【實(shí)驗前準(zhǔn)備】
適用儀器：zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
【檢驗方法】
全過程樣本、試劑及實(shí)驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。
1取一支 15ml 離心管，先加入中性粒細(xì)胞分離液試劑 A：3ml，后加入 80%濃度試劑 A溶液（中性粒細(xì)胞分離液試劑 A：樣本稀釋 液=4：1 的混合液）：1.5ml，形成梯度界面。
2制備血液樣本：抗凝血液與紅細(xì)胞沉降液按 1：1 比例混勻后，小心加于分離液梯度界面之上，800g 離心 20min。
3離心后，血漿層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細(xì)胞層，取下層白色環(huán)狀中性粒細(xì)胞層（會有少量紅細(xì)胞混雜），加 3-5 倍體積清洗液混勻，400g 離心 10min。
4離心后棄上清，后可通過兩種方法去除紅細(xì)胞。
方法一：細(xì)胞沉淀用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞（具體方法參見“紅細(xì)胞裂解液說明書”）。
方法二：
1細(xì)胞沉淀用 1ml 紅細(xì)胞沉降液重懸，加于 3ml 中性粒細(xì)胞分離液試劑 A 之液面上，400g 離心 20min。
2取白色環(huán)狀細(xì)胞層，加 3-5 倍體積清洗液混勻，250g 離心 10min，重復(fù)洗滌 2-3 次，獲得目的細(xì)胞（如仍有少量紅細(xì)胞混雜，使用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞）。
【注意事項】
1全過程樣本、試劑及實(shí)驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*的實(shí)驗結(jié)果，在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗，血液存放時間越長，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。
2本實(shí)驗不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。
3分離液用量大于血液樣本時，分離效果更佳。
4請勿使用具有紅細(xì)胞保護(hù)成分的抗凝劑，否則影響分離效果（離心后，紅細(xì)胞不能*沉至離心管底部）。
【儲存條件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】
本實(shí)驗中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。
【相關(guān)實(shí)驗技術(shù)方案】
1所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
2所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
3所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法
A.流式細(xì)胞技術(shù)
B.免疫組化技術(shù)
C.原位雜交技術(shù)
D.PCR 技術(shù)
【可能存在的問題及解決方法】
1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：
出現(xiàn)情況 | 出現(xiàn)原因 |
| 建議解決方案 |
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離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層 | 轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短 | 適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速 |
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離心后目的細(xì)胞存在于分離液中 | 轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長 |
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| 離心后白環(huán)層彌散 | 細(xì)胞密度過大 | 調(diào)整細(xì)胞密度 |
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| 離心后白環(huán)層太淺或看不見 | 細(xì)胞密度過小 |
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?2本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，恒定離心時間，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。
3本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到*分離效果，離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min 為準(zhǔn)。
